เมื่อบาร์บี้และสเตซี่น้องสาวสุดซ่าส์ต้องพาซากุระ สุนัขแสนซนของพวกเธอไปรักษาที่คลินิกสัตว์ แต่กลับพบว่าคลินิกแห่งนี้มีเงื่อนงำปริศนา ทั้งคู่จึงต้องร่วมมือกันสืบหาความจริงที่ซ่อนอยู่เบื้องหลังการหายตัวไปของสัตว์เลี้ยงในเมือง ด้วยความฉลาดและความกล้าหาญ พวกเธอจะสามารถช่วยเหลือทุกคนให้กลับมาอย่างปลอดภัยได้หรือไม่
